El laboratorio debe suministrar una serie de análisis que nos permitan obtener una radiografía de lo que sucede en el establecimiento con el objetivo de identificar el problema/s e implementar las medidas correctivas para resolverlo/s.
2.Información suministrada por el laboratorio: Interpretación y resultados de muestras de leche de tanque, muestras individuales y antibiogramas. Otros controles complementarios son: análisis de agua, análisis de camas, productos antisépticos, control de productos de limpieza, etc.
El laboratorio debe suministrar una serie de análisis que nos permitan obtener una radiografía de lo que sucede en el establecimiento con el objetivo de identificar el problema/s e implementar las medidas correctivas para resolverlo/s, a fin de establecer un programa de producción de leche de calidad y mastitis sustentable en el tiempo.
Una herramienta estratégica para el diagnóstico y posterior monitoreo de la marcha de un programa es el cultivo de leche de tanque. Sobre una única muestra de leche de tanque se realizan una serie de análisis que nos permiten identificar las deficiencias higiénicas y de manejo del rodeo y la presencia y cuantificación de patógenos contagiosos de mastitis.
Así mismo, es valioso contar con el análisis de muestras individuales de leche compuesta y/o de cuartos, de vacas y vaquillonas de primer parto en diferentes períodos de lactancia, y de casos clínicos.
Esto permite identificar los patógenos de mastitis prevalentes en el rodeo, así mismo las muestras de vacas y vaquillonas recién paridas nos ayuda a identificar problemas en el manejo de vaca preparto (S.uberis y Coliformes) e indentificar animales infectados con patógenos contagiosos (S.aureus y/o S.agalaciae).
En vacas de dos o mas lactancias permite tener una idea efectividad de terapia de secado. En vaquillonas de primera lactancia da una idea clara de la existencia de un problema en esta categoría. Los resultados de los antibiogramas nos brindan información sobre sensibilidad a las drogas existentes en el mercado para seleccionar los tratamientos, mas adecuados.
Las muestras individuales son recolectadas y analizadas siguiendo las recomendaciones del NMC (1). En los casos donde el reporte del especialista de campo indique fallas en los tratamientos en lactancia, combinados con elevados casos de mastitis clínicas, y/o elevados conteo celulares en leche de tanque (BTSC), alta frecuencia de aislamientos negativos, (entre otros), se deberá proceder a realizar siembras especiales como preincubación de las muestras individuales o siembras en un medio especiales para reconstituir "formas L."
La interpretación de los resultados de los análisis de laboratorio nos permite detectar el problema/s y tomar decisiones en dos niveles:
1 . Rodeo
Detección de fallas asociadas a la limpieza de equipos y/o funcionamiento
Detección de fallas asociadas a la rutina de ordeño
Presencia de patógenos contagiosos
Problemascomposicionales: asociados a alteraciones metabólicas y/o problemas nutricionales
Patógenos prevalentes y su distribución
2. Animales
Tratamientos
Refugo
segregación
El muestreo de leche de tanque nos permite detectar los problemas a, b, c y dcitados en el punto 1. Mientras que el análisis de muestras individuales acompañadas de los datos aportados por la Prueba de Mastitis California o CCS individual nos permite realizar todas las acciones descriptas en el punto 2, estas también nos permiten obtener la información necesaria para detectar el o los patógenos prevalente/s en el rodeo, esto corresponde a lo citado en el primer punto.
Análisis leche de Tanque
La toma de muestra para el análisis de leche de tanque se debe realizar siguiendo la normativa establecida FIL/IDF (Norma 50 B de 1985), el cuadro siguiente muestra los análisis bacteriológicos y de composiciones efectuadas en la misma, la meta deseada se encuentra indicada en la segunda columna.
Indicadores Celulares
1. Conteo Celular en Leche de Tanque (BTSC)
La inclusión del conteo de células somáticas en leche de tanque es esencial para evaluar con precisión la incidencia de mastitis subclínica en el rodeo.
2.Indicadores Microbiológicos
Conteo de Bacterias en Placa sin y con Incubación Previa de la muestra
EL conteo de bacterias sin incubación previa de la muestra (CBV) se realiza siguiendo las recomendaciones de la FIL/IDF. Fue implementado antes de contar con la norma de refrigeración para leche cruda.
Su utilidad para detectar problemas es baja. Su ventaja es la elevada reproductividad y repetitibilidad, y ser el método de referencia para cuantificar conteos de bacterias en leche. Su resultado en la actualidad es sólo indicativo tanto para la industria como para el ganadero, sí es de utilidad cuando va acompañado del resultado del conteo de bacterias con incubación previa de la muestra (CPI).
El CPI permite detectar la presencia de bacterias psicrófilas. Las bacterias psicrófilas son aquellas capaces de desarrollar a bajas temperaturas, entre 4 y 7 ºC, independientemente de su temperatura optima de crecimiento.
En la actualidad la leche es mantenida a bajas temperaturas por largos períodos, haciendo necesaria la incubación previa a la siembra de la muestra a una temperatura intermedia durante un determinado período de tiempo (12.8 ºC-18 horas) esto permite a las bacterias adaptarse a las temperaturas de incubación establecidas por las normativas de FIL (30ºC) o APHA ( 32ºC).
El CPI permite predecir el riesgo durante el procesamiento industrial de la leche por presencia de exoenzimastermoresistentes provenientes del desarrollo de bacterias psicrófilas. Acuña y col.(1998)(7) Estas enzimas son activas a bajas temperaturas y van degradando la fracción proteica (proteasas) y el glóbulo graso (lipasas y fosfolipasas) de la leche.
Reinheimer y Candioti (1994) (8). La bacteria psicrófila más frecuente en leche es Pseudomonasspp (origen : agua), le sigue en importancia Bacillusspp ( Origen : tierra).
Las enzimas producidas durante el almacenamiento de la leche sobreviven a los procesos térmicos empleados para la producción de leche pasterizada por el sistema HTST (pasterización a 73 ºC por 15 seg.) y de leche larga vida obtenida mediante el sistema UAT (140 ºC1 a 2 Seg.); limitando la vida útil en leche UAT (Gelificación). También reducen los rendimientos queseros por degradación de componentes deseables de la leche, aumento de defectos como sabores rancios, etc.
Por otra parte, las muestras de leche de tanque son tomadas por las Usinas Lácteas en el establecimiento en el momento de su recolección. En muchos casos se emplean conservantes para evitar el desarrollo bacteriano hasta la llegada al laboratorio(azidiol, bromopol).
El análisis es realizado mediante equipos electrónicos que son básicamente contadores de partículas, el resultado obtenido es transformado mediante tablas a valores de UFC/ ml, la sensibilidad de este método es de orden 10.000 UFC/ml de acuerdo a lo indicado por FIL/IDF. En la actualidad este valor es elevado, es muy frecuente obtener CBV entre 3.000 a 5.000 UFC/mL en un establecimiento.
Un dato de utilidad para identificar problemas es la relación CPI/CBV, si esta es mayor a 2 puede estar indicando problemas en el almacenamiento de la leche, problemas de limpieza o de funcionamiento de equipos y/o presencia de películas bacterianas (Biofilms), que pueden estar o no asociados a fallas en la preparación de los pezones previo al ordeño.
Conteo de Bacterias coliformes (CC)
El alto CC en combinación con un CBV y CPI elevado y bajo valor de CLP, puede indicar problemas en la preparación de los pezones, ordeño de ubres mojadas o sucias, en este caso el nivel de patógenos de origen ambiental es elevado.
El valor de CC también puede ser elevado por fallas en la refrigeración de la leche y/o por fallas en la limpieza y/o desinfección de equipos, pero en estos casos esta asociado a un incremento en el conteo de bacterias en leche pasterizada (CLP), combinado con valores elevados de CBV y CPI.
Un método simple para hallar una posible fuente de problemas para el laboratorista es diferenciar si hay predominio de bacterias Gram negativas no fermentadoras de lactato, una alta incidencia de este grupo bacteriano puede indicar la presencia de películas bacterianas en las superficies de los equipos.
Conteo en leche pasterizada (CLP)
El conteo en leche pasterizada identifica las bacterias termoresistentes. Un valor elevado indica problemas en la higiene de equipos y/o desinfección y normalmente esta asociado a elevados CBV,CPI y CC.
Conteo de Hongos y Levaduras (L)
La presencia de formas levuliformes en la muestra de leche de tanque esta normalmente asociado a problemas graves de limpieza, alimentos contaminados, alto porcentaje de animales en tratamiento, presencia de algún inhibidor de tipo antibiótico o no antibiótico. También se realiza en aquellos rodeos en que se detecta presencia de flora oportunista en muestras individuales por ejemplo: Protothecaspp. o en los casos en que ha habido antecedentes de "mastitis atípicas " consecuencia del consumo de alimentos contaminados.
Aislamiento de Patógenos de Mastitis
El aislamiento en leche de tanque permite la identificación y cuantificación de patógenos contagiosos en el rodeo y del nivel de patógenos ambientales. La sensibilidad del método para la detección de patógenos contagiosos en el rodeo es 90 % para Streptococcusagalactiae, 75 % para Staphylococcusaureus y 50 % para Mycoplamaspp.Schukken .H (2000)(9). La sensibilidad del método se incrementa con muestreos seriados y guarda estrecha relación con el volumen de muestra inoculado.
El cultivo puede ser realizado en placas de agar sangre ovina (AS) o pueden emplearse medios selectivos, esto facilita el diagnostico y la cuantificación de patógenos, en especial cuando se procesa un numero importante de muestras. Farnsworth. R (1983) (10).
La frecuencia de muestreo empleada en nuestro caso como herramienta para el diagnostico se realiza por practicidad sobre una única muestra, lo optimo seria el uso de leche de tanque proveniente de tres muestreos realizados en días consecutivos.
Las dos primeras muestras son conservadas a temperatura de freezer y la correspondiente al ultimo día se conserva a temperatura de 4ºC y debe ser procesada dentro de las 24 horas de su colección, esto es mas adecuado cuando se sospecha la presencia de Mycoplasmaspp. por la baja sensibilidad del método para detectar este patógeno.
El volumen inoculado en la placa es de 20 a 25 µl de leche, las muestras son sembradas en placas con los siguientes medios de cultivo: a. Agar sangre bovina al 5 % (AS) se emplea para identificar flora contaminante total y tipificación de grupos bacterianos específicos (Corynebacteriumspp), medios selectivos: para Staphylococcus spp. ( VogelJohnson o AgarBairdParker), Streptococcusspp (Medio de Edwards Modificado ) , Mycoplasmaspp (Medio de Hayflick Modificado).
Esto no puede ser realizado mediante el CBV dado que no permite la diferenciación de los diferentes géneros bacterianos, además ciertas bacterias tienen escaso crecimiento en agar para recuento en placa.
Análisis Complementario
Agua
El agua utilizada en la limpieza y/o lavado de pezones es una fuente de riesgo, se debe realizar un análisis bacteriológico. Muchas veces, el alto conteo de bacterias en leche de tanque esta asociado a la contaminación directa y/o indirecta con el agua.
Por otra parte, el análisis químico del agua nos permite corregir y/o establecer una correcta rutina de lavado en los equipos y determinar las dosis adecuadas de productos de limpieza Contaminación de camas Es importante establecer el nivel de patógenos en las camas dado que es uno de los factores que puede incrementar los problemas de mastitis en el rodeo e incrementar la cuenta bacteriana en leche de tanque.
Las camas orgánicas en un buen día tienen normalmente un nivel de bacterias coliformes de alrededor de 100.000 por gramo, mientras que en un mal día este valor se puede elevar hasta 100.000.000 por gramo.Análisis de Antisépticos para pezones y/o productos de limpieza y desinfección de equipos.
El control de productos antisépticos de pezones es una práctica que puede ser recomendada en los casos donde se observa alta incidencia de patógenos contagiosos y no se observa en el establecimiento fallas en la forma de realizar el postdipping y/o en los casos donde se observan lesiones por agentes químicos.Una vez identificada la fuente/s del problema, se corrige y se implementa el programa de Control de Calidad de Leche y control de Mastitis.
Mensualmente se realiza el monitoreo de leche de tanque para evaluar y detectar fallas en el plan. Se realiza el análisis bacteriológico de los casos clínicos y se toman muestras compuestas de todos los animales después del parto ( tomadas a los 5 a 10 días después del parto), incluidas vaquillonas de primera lactancia. El objetivo es segregar o refutar aquellas vacas infectadas con S.aureus y/o S.agalactiae.
Las vaquillonas de primer parto infectadas con estos patógenos son tratadas durante l primer mes de lactancia los % de curación para esta categoría son elevados. AcuñaC.N y ChertcoffR.E (2003)(13 y 14). Si el % de vaquillonas de primer parto infectadas con patógenos contagiosos supera el 5 % se deberá evaluar la posibilidad de implementar un tratamiento 45 -60 días antes del parto.
En líneas generales, podemos mencionar que en los establecimientos en los cuales se identifica Streptococcusagalactiae en leche de tanque, se recomienda realizar una bacteriología de todo el rodeo, dado que dicho patógeno es erradicable y disminuye en forma notable la calidad de la leche, elevando los CCS y CBV.
Si el patógeno que prevalece es Staphylococcusaureus, se realiza el refugo y segregación de los animales infectados por medio del análisis de muestras compuestas de vacas en el inicio del ciclo de lactancia.
Es indispensable recalcar la importancia que tiene la correcta toma de muestra en leche de tanque, cuartos o pool de vaca. Es imposible realizar un correcto diagnóstico de laboratorio a partir de muestras contaminadas.
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